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申基
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人類FGFR3基因突變檢測試劑盒（熒光PCR法）

技術參數(shù)

產(chǎn)品描述

　　摘要

　　本產(chǎn)品用于定性檢測膀胱癌患者福爾馬林固定石蠟包埋樣本RNA中人類FGFR3基因上的6個熱點突變;運用熒光PCR技術，當天得到檢測報告，滿足臨床及時診治需求，輔助臨床實現(xiàn)腫瘤的個體化治療。

　　檢測原理

　　本試劑盒檢測原理是基于擴增阻礙突變系統(tǒng)(amplification refractory mutation system，ARMS)結合熒光定量PCR技術實現(xiàn)對石蠟包埋樣本中提取的RNA進行定性檢測。ARMS-PCR基本原理是，Taq DNA聚合酶缺少3′-5′外切酶活性，如果引物的3′端堿基與模板堿基不互補，則Taq DNA聚合酶無法延伸。本試劑盒根據(jù)已知突變設計特異的突變模板互補引物，使3′端堿基與突變模板堿基完全互補，與野生型模板不互補，同時在引物3′端的第2-5個堿基引入另外一個或者兩個錯配堿基，使之與野生型模板之間形成多個錯配以阻止野生型模板的延伸，實現(xiàn)FGFR3突變基因的檢測。

　　本試劑盒中的2個融合位點的檢測原理是在融合的兩個基因的外顯子上分別設計特異性引物和taqman探針，結合熒光定量PCR技術對石蠟包埋樣本中提取的RNA進行定性檢測。

　　本試劑盒共采用了FAM、CY5和VIC三種熒光標記的探針，檢測點突變的探針采用FAM熒光標記，融合位點的探針采用CY5熒光標記，內(nèi)控采用VIC標記的熒光探針，內(nèi)控試劑監(jiān)控樣本RNA提取質量和逆轉錄等過程。本試劑盒中同時含有UNG酶，可以選擇性降解含有dU的PCR產(chǎn)物，有效降低因PCR產(chǎn)物污染導致的假陽性。每個樣本共需要6個反應孔，每個反應孔只需要加入少量提取的樣本RNA，通過內(nèi)控的CT值來判斷樣本的質量，樣本反應孔的CT值來判斷樣本的陰陽性。

　　檢驗方法

　　1. 提取膀胱癌患者福爾馬林固定石蠟包埋樣本RNA。

　　2. 按照說明書準備逆轉錄反應。

　　3. 在相應的八連管位置加入提取的RNA、陽性質控品和陰性質控品。

　　4. 進行qPCR儀上機實驗。

　　5. 根據(jù)內(nèi)控CT值和樣本CT值判讀結果。